研究級的分光光度計一般由光源、激發光源、發射光源、試樣池、檢測器、顯示裝置等部件組成。激發光源是一個為樣品提供照射光的光源,一般使用氙燈。
研究級的分光光度計工作時,由激發光源發出的白光進入激發側單色器,測定激發光譜(吸收光譜)時,改變激發光的波長,測定熒光強度對應的變化,測定熒光光譜時,激發波長固定,測量熒光強度隨發射波長的變化。
來自激發側單色器的光照向樣品,沿著這個路徑,半透半反鏡會將光束分離,一部分光到達監控檢測器,監控檢測器用來監控激發光到達樣品的強度,熒光分光光度計檢測器通常使用光電管、光電二級管、光電倍增管等。當激發光到達樣品時,樣品被激發以發出熒光,發出的熒光進入熒光側單色器。
熒光分光光度計的靈敏度是一個重要的指標。靈敏度表明如何獲得噪聲小且數據平滑的指標,該指標越大,系統越好。它也被稱為信噪比。但是靈敏度的測量條件不同,這個指標的數字也不同。若測量條件不一致,如狹縫、響應(時間常量)等,則無法進行不同系統的比較。
讀數不穩定的原因:
1、先不放比色皿,看儀器是否漂移。如果不漂移,說明儀器正常。
2、放入蒸餾水比色皿調零,讀數漂移到一定數值后,取出比色皿看一下,內壁是否有細小的氣泡。
我認為影響紫外分光光度計讀數不穩定的根本原因應該有兩類:一類是能量降低,信噪比下降,這個可能性比較大;另一類是信號接收和處理故障。